O Câncer de mama é o tipo de câncer mais comum entre as mulheres ocidentais, sendo a segunda causa de morte entre mulheres. Mais de 10% desses cânceres são hereditários, causados por mutações em genes que aumentam significativamente o risco desses tumores. Esta condição é chamada de Síndrome de Câncer de Mama e Ovário Hereditários.

Este exame analisa os todos os exons e splice sites dos genes BRCA1, BRCA2, PALB2, TP53, CDH1, STK11 e PTEN. Além disso, é realizada a avaliação de grandes deleções e duplicações em BRCA1 e BRCA2 através de MLPA, genes mais fortemente associados ao risco de desenvolvimento de câncer de mama e ovários.

BRCA1 BRCA2 CDH1 PALB2 PTEN STK11 TP53

Exigência	Descrição
Materiais	Sangue ou Saliva ou DNA extraído (para envio, entrar em contato com a Haoma)
Conservantes	EDTA
Volume Recomendável	Sangue: 4ml Saliva: mínimo de 1,5 a 2mL
Tempo de Jejum	Jejum não obrigatório
Conservação	Sangue em tubo com EDTA (tampa roxa): enviar a amostra num prazo máximo de 96h (temperatura ambiente, 18-25ºC) ou 7 dias (refrigerada, 2-8ºC), por courier. Saliva em tubo OCR-100 (ORAcollect) ou OG-500 (Oragene): enviar a amostra num prazo máximo de 15 dias (temperatura ambiente, 18-25ºC ou refrigerada, 2-8ºC), por courier.
Critérios de Rejeição	Amostra de sangue congelada. Presença de coágulo ou hemólise grosseira. Amostra coletada por mais de 96 horas. Quantidade de amostra insuficiente. Avarias no tubo e/ou recipiente do material enviado. Tubo com anticoagulante ou conservante inadequado. Amostra sem identificação. Falta de requisição médica ou do termo de consentimento assinado pelo paciente ou responsável. Se a amostra for DNA extraído, é obrigatório o envio do formulário específico (entrar em contato).
Documentos Obrigatórios	Termo de Consentimento Formulário de Requisição

A metodologia usada no exame é NGS- Sequenciamento de Segunda Geração por Multiplex e MLPA para alguns genes.

O DNA é extraído de sangue periférico ou saliva de forma automatizada (QIASymphony). A técnica principal para o preparo da biblioteca de DNA é utilizando-se a tecnologia de PCR multiplexado com molecular barcode (QiaSeqDNA V3). Caso existam regiões não adequadamente cobertas na primeira técnica, é preparada por PCR convencional seguido de Nextera ou Sanger. O sequenciamento de segunda geração é realizado na plataforma Illumina e o sequenciamento de Sanger é realizado em um sequenciador automático ABI 3500. O resultado final é uma cobertura de 100% das bases com profundidade acima de 50x nos exons e 5pb de região intrônica adjacente. A chamada de variante é feita através do transcrito de referência a partir da base A do códon de iniciação ATG alinhado contra o genoma de referência GRCh37/hg19. Para análise do número de cópias é utilizada a técnica de MLPA (kits MRC-Holland), onde os exons dos genes são hibridizados e amplificados por PCR com sondas fluorescentes específicas e o produto resultante é submetido a análise de fragmento no ABI 3500. Adicionalmente é realizada a PCR seguida de eletroforese em gel de agarose do exon 3 de BRCA2 para pesquisa da inserção ALU.

• Mutações por expansão de repeats de trinucleotídeos não são detectáveis por sequenciamento.

• Mutações intrônicas profundas ou em regiões regulatórias, como promotores, não são detectáveis no presente teste.

• Alteração epigenéticas não são detectáveis por este teste.

CÂNCER DE MAMA E OVÁRIO HEREDITÁRIOS
CÂNCER DE OVÁRIO

• Câncer de Mama
• Câncer de Ovário
• Gene BRCA1
• Gene BRCA2
• Gene CDH1
• Gene PALB2
• Gene PTEN
• genes BRCA1, BRCA2 e TP53
• Gene STK11
• Gene TP53
• PAINEL GENÉTICO