A acidemia metilmalônica é uma desordem hereditária na qual o organismo se mostra incapaz de processar apropriadamente certas proteínas e lipídios. Sem tratamento, a doença pode levar ao coma e ser fatal em alguns casos. A acidemia metilmalônica têm perfis de aminoácidos e ácidos orgânicos parecidos aos da acidemia propiônica, mas também mantêm níveis muito altos de ácido metilmalônico e concentrações de ácido láctico superiores aos da acidemia propiônica, devido à inibição do piruvato carboxilase. Mais de 25 mutações causadoras de acidemia metilmatônica já foram identificadas no gene MMAA (nome oficial: “methylmalonic aciduria (cobalamin deficiency) cblA type”). Em relação ao gene MMAB (nome oficial: “methylmalonic aciduria (cobalamin deficiency) cblB type”), mais de 20 mutações já foram associadas a esta condição.

Este exame sequencia os exons dos genes que possuem alterações sabidamente conhecidas associadas a esta desordem.

ACSF3 ALDH6A1 CD320 LMBRD1 MCEE MMAA MMAB MMACHC MMADHC MUT SUCLA2 SUCLG1 TCN2

Exigência	Descrição
Materiais	Sangue ou Saliva ou DNA extraído (para envio, entrar em contato com a Haoma)
Conservantes	EDTA
Volume Recomendável	Sangue: 4ml Saliva: mínimo de 1,5 a 2mL
Tempo de Jejum	Jejum não obrigatório
Conservação	Sangue em tubo com EDTA (tampa roxa): enviar a amostra num prazo máximo de 96h (temperatura ambiente, 18-25ºC) ou 7 dias (refrigerada, 2-8ºC), por courier. Saliva em tubo OCR-100 (ORAcollect) ou OG-500 (Oragene): enviar a amostra num prazo máximo de 15 dias (temperatura ambiente, 18-25ºC ou refrigerada, 2-8ºC), por courier.
Critérios de Rejeição	Amostra de sangue congelada. Presença de coágulo ou hemólise grosseira. Amostra coletada por mais de 96 horas. Quantidade de amostra insuficiente. Avarias no tubo e/ou recipiente do material enviado. Tubo com anticoagulante ou conservante inadequado. Amostra sem identificação. Falta de requisição médica ou do termo de consentimento assinado pelo paciente ou responsável. Se a amostra for DNA extraído, é obrigatório o envio do formulário específico (entrar em contato).

A metodologia usada no exame é Sequenciamento de Segunda Geração (NGS) por Captura.

O DNA extraído é submetido a sequenciamento de segunda geração na plataforma Illumina, após enriquecimento por um método de captura. Os dados são processados para chamada de variantes (SNVs, pequenas indels) no Pipeline Haoma.

A cobertura média esperada é de acima de 99% das bases com profundidade acima de 10x nos exons e 5pb de região intrônica adjacente, além de outras regiões não-codificantes específicas conhecidamente causadoras de fenótipos clínicos relevantes até o momento do desenho do ensaio. Genes com cobertura inferior a 98% são devidamente informados na seção de genes analisados. A numeração da variante é feita através do transcrito de referência a partir da base A do códon de iniciação ATG alinhado contra o genoma de referência GRCh37/hg19. A classificação de variantes é feita de acordo com os critérios do Colégio Americano de Genômica e Genética Clínica (ACMG). 

Este teste detecta >99% das variantes SNVs e de pequenas deleções e duplicações com até 20bp. Variantes maiores que 20bp e menores do que um éxon podem ser detectadas com sensibilidade reduzida. Variantes podem não ser relatadas caso estejam presentes em regiões gênicas não sequenciadas adequadamente, regiões ricas em repetições, regiões intrônicas profundas e áreas com pseudogenes.

Acidemia Metilmalônica

• Deficiência de metilmalonil-CoA mutase
• Painel Acidúria Metilmalônica e Homocistinúria