Este exame analisa 44 genes, sendo 40 genes por completo, incluindo todos os exons e regiões intrônicas adjacentes (+/-5pb). Adicionalmente, esse teste avalia as seguintes variantes específicas: EGFR (NM_005228.3) c.2369C>T (p.Thr790Met), HOXB13 (NM_006361.5) c.251G>A (p.Gly84Glu) e MITF (NM_000248.3) c.952G>A (p.Glu318Lys) e as regiões sem pseudogene do gene PMS2. Ainda, são analisadas as variantes patogênicas, já relatadas na literatura, na região do promotor dos genes: APC, BMPR1A, PTEN, BRCA1, BRCA2, CDH1, GREM1, MLH1, MSH2, MSH6, STK11 e TP53.

AKT1 APC ATM BAP1 BARD1 BMPR1A BRCA1 BRCA2 BRIP1 CDH1 CDK4 CDKN2A CHEK2 EGFR EPCAM GREM1 HOXB13 MEN1 MITF MLH1 MRE11A MSH2 MSH6 MUTYH NBN NF1 PALB2 PIK3CA PMS2 POLD1 POLE PTEN RAD50 RAD51 RAD51C RAD51D RB1 RECQL RET SMAD4 STK11 TP53 VHL XRCC2

Exigência	Descrição
Materiais	Sangue ou Saliva ou DNA extraído (para envio, entrar em contato com a Haoma)
Conservantes	EDTA
Volume Recomendável	Sangue: 4ml Saliva: mínimo de 1,5 a 2mL
Tempo de Jejum	Jejum não obrigatório
Conservação	Sangue em tubo com EDTA (tampa roxa): enviar a amostra num prazo máximo de 96h (temperatura ambiente, 18-25ºC) ou 7 dias (refrigerada, 2-8ºC), por courier. Saliva em tubo OCR-100 (ORAcollect) ou OG-500 (Oragene): enviar a amostra num prazo máximo de 15 dias (temperatura ambiente, 18-25ºC ou refrigerada, 2-8ºC), por courier.
Critérios de Rejeição	Amostra de sangue congelada. Presença de coágulo ou hemólise grosseira. Amostra coletada por mais de 96 horas. Quantidade de amostra insuficiente. Avarias no tubo e/ou recipiente do material enviado. Tubo com anticoagulante ou conservante inadequado. Amostra sem identificação. Falta de requisição médica ou do termo de consentimento assinado pelo paciente ou responsável. Se a amostra for DNA extraído, é obrigatório o envio do formulário específico (entrar em contato).
Documentos Obrigatórios	Termo de Consentimento Formulário de Requisição

A metodologia usada no exame é NGS- Sequenciamento de Segunda Geração por Multiplex.

O DNA é extraído de sangue periférico ou saliva de forma automatizada (QIASymphony). A técnica principal para o preparo da biblioteca de DNA é utilizando-se a tecnologia de PCR multiplexado com molecular barcode (QiaSeqDNA V3). Caso existam regiões não adequadamente cobertas na primeira técnica, é preparada por PCR convencional seguido de Nextera ou Sanger. O sequenciamento de segunda geração é realizado na plataforma Illumina e o sequenciamento de Sanger é realizado em um sequenciador automático ABI 3500. O resultado final é uma cobertura de 100% das bases com profundidade acima de 50x nos exons e 5pb de região intrônica adjacente. A chamada de variante é feita através do transcrito de referência a partir da base A do códon de iniciação ATG alinhado contra o genoma de referência GRCh37/hg19. Adicionalmente é realizada a PCR seguida de eletroforese em gel de agarose do exon 3 de BRCA2 para pesquisa da inserção ALU.

- Este teste detecta pequenas deleções e duplicações até 17 bp, mas grandes deleções e duplicações não são detectadas por esta metodologia. Outras alterações estruturais,como inversões e translocações também não são detectadas. Havendo suspeita de algumas destas alterações, pode-se usar metodologias como array CGH, MLPA, qPCR ou FISH. - Mutações por expansão de repeats de trinucleotídeos não são detectáveis por sequenciamento. - Mutações intrônicas profundas ou em regiões regulatórias, como promotores, não são detectáveis no presente teste. - Alteração epigenéticas não são detectáveis por este teste.

CÂNCER COLORRETAL - CCR
CÂNCER DE MAMA E OVÁRIO HEREDITÁRIOS
CÂNCER DE OVÁRIO
CÂNCER GÁSTRICO
Síndrome de Li-Fraumeni
Síndrome de Lynch

Termo de Consentimento

• BRCA
• BRCA2 EXON 3 ALU
• Câncer de Intestino
• Câncer de Mama
• Câncer de Ovário
• genes BRCA1 e BRCA2