A prova cruzada ou “cross-match" por Citometria de Fluxo é uma técnica com alta sensibilidade na detecção de anticorpos anti-HLA de baixo título e é empregada para avaliar se o receptor não é sensibilizado contra os Antígenos de histocompatibilidade do doador (ainda que seja seu primeiro transplante), o que deve resultar negativa. Esta avaliação é realizada através de um ensaio "in vitro" no qual uma amostra de soro do receptor é misturado com linfócitos do doador e incubados por um período. Após a incubação, durante a qual deve ocorrer a formação de complexo antígeno-anticorpo (se no soro houver a presença de anticorpos anti-HLA), adiciona-se a reação, anticorpos monoclonais marcados com fluorescência direcionados aos linfócitos T e B, na qual será detectado pelo Citometro de Fluxo a reação positiva ou negativa. Na reação positiva, uma vez que existem anticorpos específicos anti-doador em circulação, se for realizado um transplante, este poderá ser rapidamente rejeitado. A reação de "cross-match" positiva pode ser observada em pacientes que foram submetidos a transfusões múltiplas, mulheres multíparas ou indivíduos que já foram previamente transplantados. Este exame também pode ser realizado com a finalidade de investigação de abortos de repetição.

A metodologia usada no exame é Prova Cruzada por Citometria de Fluxo.

A Prova Cruzada é uma técnica utilizada para determinar a existência de anticorpos anti HLA no soro do receptor direcionados contra os antígenos HLA expressos na membrana da célula do doador e quando realizada pelo método de Citometria de Fluxo permite a detecção de baixos títulos de anticorpos circulantes no soro do receptor. A presença de anticorpos anti-HLA doador específico é um risco para o transplante e é responsável pelas rejeições humorais. Os linfócitos T e B do doador são separados por seleção negativa utilizando a técnica RosseteSep e separação por gradiente de densidade Ficoll-Hypaque e cruzados com o soro do receptor. É adicionado o reagente anti-IgG que irá se ligar onde houver ligação antígeno-anticorpo e emitir fluorescência, também é adicionado anti-CD3 (linfócitos T) e anti-CD19 (linfócitos B) que se ligam nos linfócitos possibilitando a diferenciação dos linfócitos T e B. Esta reação é analisa pelo Citômetro de Fluxo que gera dados brutos que são interpretados pelo setor de Histocompatibilidade. A reação positiva indica a presença de anticorpo anti-HLA doador específico e recomenda-se a busca de um novo doador.

• Prova Cruzada por Citometria Linf T/B/Recep