Este painel consiste no sequenciamento de todos os exons e splice sites dos genes BRCA1 e BRCA2. Adicionalmente, é realizada a detecção de grandes deleções e duplicações nesses genes, por MLPA. Mutações nesses genes estão associadas a maior risco de desenvolvimento de Câncer de Mama e Ovário Hereditários.

A metodologia usada no exame é NGS- Sequenciamento de Segunda Geração por Multiplex e MLPA para alguns genes.

O DNA é extraído de sangue periférico ou saliva de forma automatizada (QIASymphony). A técnica principal para o preparo da biblioteca de DNA é utilizando-se a tecnologia de PCR multiplexado com molecular barcode (QiaSeqDNA V3). Caso existam regiões não adequadamente cobertas na primeira técnica, é preparada por PCR convencional seguido de Nextera ou Sanger. O sequenciamento de segunda geração é realizado na plataforma Illumina e o sequenciamento de Sanger é realizado em um sequenciador automático ABI 3500. O resultado final é uma cobertura de 100% das bases com profundidade acima de 50x nos exons e 5pb de região intrônica adjacente. A chamada de variante é feita através do transcrito de referência a partir da base A do códon de iniciação ATG alinhado contra o genoma de referência GRCh37/hg19. Para análise do número de cópias é utilizada a técnica de MLPA (kits MRC-Holland), onde os exons dos genes são hibridizados e amplificados por PCR com sondas fluorescentes específicas e o produto resultante é submetido a análise de fragmento no ABI 3500. Adicionalmente é realizada a PCR seguida de eletroforese em gel de agarose do exon 3 de BRCA2 para pesquisa da inserção ALU.

• Mutações por expansão de repeats de trinucleotídeos não são detectáveis por sequenciamento.

• Mutações intrônicas profundas ou em regiões regulatórias, como promotores, não são detectáveis no presente teste.

• Alteração epigenéticas não são detectáveis por este teste.

• BRCA
• Câncer de Mama
• Câncer de Ovário
• genes BRCA1 e BRCA2