O sequenciamento completo do gene CFTR pode detectar mutações responsáveis pela Fibrose Cística. A Fibrose Cistica é uma doença multissistêmica que afeta o trato respiratório e o pâncreas exócrino, levando a um quadro de pneumopatia crônica associada a insuficiência pancreática e má absorção intestinal.

É uma doença autossômica recessiva causada por defeitos no gene CFTR, o qual codifica uma proteína que funciona como um canal de cloro e que regula o fluxo de outros íons pela superfície apical de células epiteliais. Essa alteração vai resultar em transporte anormal de íons de cloro através de ductos das células sudoríparas e da superfície epitelial das células da mucosa, resultando em permeabilidade diminuída ao cloro e aumento da viscosidade do muco.

O estudo molecular é indicado para confirmação do diagnóstico em pessoas com manifestações clínicas de Fibrose Cística, identificação de portadores de mutação no gene da FC, diagnóstico pré-natal e em doadores de esperma e óvulos.

Neste estudo é realizado o sequenciamento completo do gene CFTR, o que inclui a análise dos exons que contêm as mutações de maior prevalência no Brasil: Delta F508, R553X e N1303K.

A metodologia usada no exame é NGS- Sequenciamento de Segunda Geração por Multiplex.

O DNA é extraído de sangue periférico ou saliva de forma automatizada (QIASymphony). A técnica principal para o preparo da biblioteca de DNA é utilizando-se a tecnologia de PCR multiplexado com molecular barcode (QiaSeqDNA V3). Caso existam regiões não adequadamente cobertas na primeira técnica, é preparada por PCR convencional seguido de Nextera ou Sanger. O resultado final é uma cobertura de 100% das bases com profundidade acima de 50x nos exons e 5pb de região intrônica adjacente. A chamada de variante é feita através do transcrito de referência a partir da base A do códon de iniciação ATG alinhado contra o genoma de referência GRCh37/hg19.

- Este teste detecta pequenas deleções e duplicações até 17 bp, mas grandes deleções e duplicações não são detectadas por esta metodologia. Outras alterações estruturais,como inversões e translocações também não são detectadas. Havendo suspeita de algumas destas alterações, pode-se usar metodologias como array CGH, MLPA, qPCR ou FISH. - Mutações por expansão de repeats de trinucleotídeos não são detectáveis por sequenciamento. - Mutações intrônicas profundas ou em regiões regulatórias, como promotores, não são detectáveis no presente teste. - Alteração epigenéticas não são detectáveis por este teste.

• 1898+1G>A, 2789+5G>A, 3849+10kb>T, A455E, R1162X, R560T, 3120+1G>A, 3659delC, G551D, G85E, N1303K, 711+1G>T, R334W, 1717-1G>A, W1282X, R117H, 621+1G>T
• 32 mutações e pesquisa variantes poliT no intron 8 para o sexo masculino
• Doença Fibrocística do Pâncreas
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• PoliT
• Poli-T
• R347P, R553X, 2184delA, ?I507, ?I508, R347H, S549N, S549R, V520F, 394delTT, 3876delA, 3905insT, 2183AA>G, 1078delT, G542X, F508C, I148T
• Sequenciamento de Fibrose Cistica