O sequenciamento completo do gene HFE detecta mutações responsáveis pela Hemocromatose Hereditária, incluindo as comumente testadas (C282, H63 e S65).

A Hemocromatose hereditária (HH), causada por alterações no gene HFE, é uma doença autossômica recessiva, bastante comum na população caucasiana. É caracterizada por um aumento na absorção de ferro pelo intestino, com conseqüente deposição em vários órgãos, principalmente fígado, articulações, coração, hipófise e pele.

O gene HFE codifica uma molécula HLA de classe-1 de 343 aminoácidos. Duas mutações nesse gene foram inicialmente identificadas, uma resultante de uma troca de uma cisteína por uma tirosina no nucleotídeo 282 (C282Y) e outra resultante de uma troca de uma histidina por um aspartato na posição 63 (H63D). A maioria dos pacientes (mais de 80%) com HH típica são hemozigotos para a mutação C282Y. Na parcela restante cerca de 75% são heterozigotos compostos (usualmente C282Y / H63D). Entre indivíduos do norte da Europa, perto de 100% dos pacientes com características clínicas de HH são hemozigotos C282Y. Freqüências mais baixas de hemozigose C282Y são encontradas em indivíduos afetados do mediterrâneo e do sul da Europa. Existem relatos raros de casos de HH em que os indivíduos são homozigotos para a mutação H63D. Uma outra mutação resultante da substituição de uma serina por uma cisteína no aminoácido 65 (S65C) foi recentemente sugerida como causadora de uma forma moderada da doença.

A mais penetrante dessas mutações é a C282Y, sendo que os homozigotos para essa mutação somam cerca de 90% dos casos de HH. Em contraste, homozigose para as mutações H36D e S65C geralmente causam doença leve ou sem conseqüências clinicas.

A metodologia usada no exame é NGS- Sequenciamento de Segunda Geração por Multiplex.

O DNA é extraído de sangue periférico ou saliva de forma automatizada (QIASymphony). A técnica principal para o preparo da biblioteca de DNA é utilizando-se a tecnologia de PCR multiplexado com molecular barcode (QiaSeqDNA V3). Caso existam regiões não adequadamente cobertas na primeira técnica, é preparada por PCR convencional seguido de Nextera ou Sanger. O resultado final é uma cobertura de 100% das bases com profundidade acima de 50x nos exons e 5pb de região intrônica adjacente. A chamada de variante é feita através do transcrito de referência a partir da base A do códon de iniciação ATG alinhado contra o genoma de referência GRCh37/hg19.

- Este teste detecta pequenas deleções e duplicações até 17 bp, mas grandes deleções e duplicações não são detectadas por esta metodologia. Outras alterações estruturais,como inversões e translocações também não são detectadas. Havendo suspeita de algumas destas alterações, pode-se usar metodologias como array CGH, MLPA, qPCR ou FISH. - Mutações por expansão de repeats de trinucleotídeos não são detectáveis por sequenciamento. - Mutações intrônicas profundas ou em regiões regulatórias, como promotores, não são detectáveis no presente teste. - Alteração epigenéticas não são detectáveis por este teste.

• Gene HFE
• Hemocromatose
• Hemocromatose Hereditária
• Mutações C282Y, H63D, Y250X