Nesse teste são sequenciados todos os exons e splice sites do gene TTR. Variantes patogênicas nesse gene são associadas com Amiloidose Familiar por Transtirretina. Uma variante em particuar, Val30Met {p.(Val50Met)}, causa a maioria dos casos de neuropatia amiloidótica por TTR. Outras variantes são associadas com outros quadros de amiloidose, como a cardíaca ou meníngea. Esse teste sequencia todo o gene, sendo capaz de detectar a mutação Val30Met {p.(Val50Met)} ou qualquer outra substituição de base.

A metodologia usada no exame é NGS- Sequenciamento de Segunda Geração por Nextera NGS- Sequenciamento de Segunda Geração por Nextera ou sequenciamento bidirecional por Sanger.

O DNA é extraído de sangue periférico ou saliva de forma automatizada (QIASymphony) O preparo da biblioteca de DNA pode ser utilizando a tecnologia de PCR seguido por Nextera ou através de PCR seguido por Sanger. Caso existam regiões não adequadamente cobertas na primeira técnica, é preparada uma nova biblioteca de Nextera ou Sanger. O sequenciamento de segunda geração é realizado na plataforma Illumina e o sequenciamento de Sanger é realizado em um sequenciador automático ABI 3500. O resultado final é uma cobertura de 100% das bases com profundidade acima de 50x de todas as regiões codificantes e junções intron-exon de 15 pares de base do gene TTR (transcrito NM_000371.3) utilizado NGS ou sequenciamento bidirecional em Sanger. Quando variantes patogênicas são encontradas, os achados são confirmados por sequenciamento Sanger. A chamada de variante é feita através do transcrito de referência a partir da base A do códon de iniciação ATG alinhado contra o genoma de referência GRCh37/hg19.

- Este teste detecta pequenas deleções e duplicações até 17 bp, mas grandes deleções e duplicações não são detectadas por esta metodologia. Outras alterações estruturais,como inversões e translocações também não são detectadas. Havendo suspeita de algumas destas alterações, pode-se usar metodologias como array CGH, MLPA, qPCR ou FISH. - Mutações por expansão de repeats de trinucleotídeos não são detectáveis por sequenciamento. - Mutações intrônicas profundas ou em regiões regulatórias, como promotores, não são detectáveis no presente teste. - Alteração epigenéticas não são detectáveis por este teste.

• amiloidose
• Amiloidose Familiar por Transtirretina
• ATTR
• Transtiretina
• TTR p.(Val50Met)
• Val30Met